Colorazione di Gram
SCOPO
Differenziare i batteri Gram+ dai batteri Gram-
TEORIA
I
batteri sono stati scoperti da Leeuwenhoek nel 1673, fanno parte del regno delle
Monere, sono microrganismi unicellulari procarioti privi di una membrana
nucleare, hanno un diametro di pochi micron.Invisibili ad occhio nudo, sono
gli esseri viventi più numerosi. Essi, infatti, sono presenti sia
nell’ambiente naturale (aria, acque, terreno), sia come parassiti nell’uomo,
negli animali e nei vegetali. I batteri possono avere forma sferica, cilindrica o
incurvata. I batteri sferici sono chiamati cocchi, che nel riprodursi possono
formare colonie con particolari disposizioni nello spazio: diplococchi, a
coppia; streptococchi, a catenella; stafilococchi, a grappolo; sarcine, otto
cocchi a forma di cubo; tetradi, a gruppi di quattro cocchi.. I batteri
cilindrici sono detti bacilli; essi come i cocchi possono disporsi a coppie o a
catena, e sono detti diplobacilli e streptobacilli. I batteri incurvati sono
detti vibrioni, se cilindrici con una sola curvatura, spirilli, se a forma di
sinusoide con poche e larghe volute, e spirochete se con sinusoidi molto
numerose e ravvicinate.
Per allestire una coltura batterica vengono usate diverse tecniche di semina. la tecnica più usata è l’inclusione in piastra che consiste nell’intrappolare nel terreno di coltura i microrganismi da ognuno dei quali avrà origine una colonia isolata.
Allo scopo di
classificare i batteri in Gram+ o Gram- viene impiegata appunto la colorazione
di Gram. E’ la più importante colorazione usata in batteriologia. Messa a
punto da H.C.Gram nel 1884, consente di definire batteri Gram+ quei batteri che
trattati con questa colorazione risultano al microscopio colorati in blu -
violetto intenso, mentre i batteri Gram- sono quelli che risulteranno di colore
rosso. La diversa reazione dei batteri alla colorazione di Gram è dovuta alla
diversa composizione chimica della loro parete batterica.
ACQUA DELL’ACQUARIO,
PIPETTA DA 1 ml, PIASTRA PETRI, TERRENO
PCA, INCUBATORE, BECHER, ACQUA DISTILLATA, ANSA STERILE, BECCO BUNSEN,
KIT PER LA COLORAZIONE DI GRAM, GUANTI.
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CON UN BECHER E’ STATA PRESA UN PO’ DI ACQUA
DELL’ACQUARIO.
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TRAMITE UNA PIPETTA ABBIAMO PRELEVATO 1 ml DEL
CAMPIONE CHE E’ STATO DEPOSTO SUL FONDO DELLA PIASTRA PETRI.
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DOPO E’ STATO DISTRIBUITO IL TERRENO NELLA
QUANTITA’ DI CIRCA 15 ml, SONO STATI EFFETTUATI MOVIMENTI ROTATORI PER
INCLUDERE IL CAMPIONE NEL TERRENO DI COLTURA.
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E’ STATO INCUBATO IL TUTTO A TEMPERATURA
AMBIENTE PER QUALCHE GIORNO.
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TERMINATO IL PERIODO DI INCUBAZIONE E’ STATA
ESEGUITA LA COLORAZIONE DI GRAM NEL SEGUENTE MODO:
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SU DI UN VETRINO PORTAOGGETTI SI DEPONE UNA GOCCIA
DI ACQUA DISTILLATA, CON UN’ANSA STERILE SI PRELEVA UNA COLONIA E LA SI
STEMPERA NELLA GOCCIA D’ACQUA, SI FISSA SULLA FIAMMA.
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RICOPRIRE IL PREPARATO CON CRISTALVIOLETTO E
LASCIARE AGIRE PER 1 MINUTO.
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SCIACQUARE CON ACQUA PER ELIMINARE L’ECCESSO DI
COLORANTE.
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RICOPRIRE CON IL LIQUIDO DI LUGOL E LASCIARE AGIRE
PER 1 MINUTO, LAVARE CON ACQUA.
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DECOLORARE CON IL DIFFERENZIATORE PER UN TEMPO
VARIABILE TRA 30 E 60 SECONDI,FINO A CHE IL PREPARATO NON LASCIA PIU’ COLORE
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LAVARE CON ACQUA.
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CONTRASTARE CON LA SAFRANINA PER 1 MINUTO,
SCIACQUARE CON ACQUA, SGOCCIOLARE IL VETRINO E LASCIARLO ASCIUGARE ALL’ARIA.
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OSSERVARE AL MICROSCOPIO CON OBIETTIVO AD
IMMERSIONE.
RISULTATI
I BATTERI GRAM+ SONO VIOLA, MENTRE I
GRAM- SONO ROSSI.
CONCLUSIONI
ALL’OSSERVAZIONE MICROSCOPICA SI E’ NOTATO CHE LA MAGGIOR PARTE DEI BATTERI HANNO FORMA CILINDRICA E QUINDI SONO BACILLI E SONO COLORATI DI ROSSO QUINDI GRAM -.
